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白木香果皮提取物的抗菌活性

更新时间 2011-5-7 15:03:37 点击数:

白木香果皮提取物的抗菌活性
李浩华1,章卫民1*,高晓霞2,吴关庆3,陈玉婵1,王磊1
(1.广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公共实验室,
广州510070;2.广东药学院,广州510006;3.信宜市珍稀沉香发展有限公司,广东信宜525300)
[摘要]目的:为开发利用白木香果皮资源,对其提取物进行抗菌活性评价。方法:用三氯甲烷对白木香果皮进行提取,
提取物分别采用滤纸片法和生长速率法对不同细菌和真菌进行抗菌活性测定,并采用连续稀释法测定其最低抑菌浓度。结
果:白木香果皮提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌有显著抑制作用,最小的抑菌浓度分别为6.25,625,
12.5 g·L
-1
,对大肠杆菌则没有抑制效果;对绿色木霉、黑曲霉、黄曲霉也有明显的抑制作用,最小的抑菌浓度分别为6.25,
6.25,12.5 g·L-1。结论:白木香果皮三氯甲烷提取物具有显著的抗菌活性,值得开发利用。
[关键词]白木香果皮;提取物;抗菌活性;最低抑菌浓度
[中图分类号]R285.5[文献标识码]A[文章编号]1005-9903(2011)07-0100-04
      全世界瑞香科(Thymelaeaceae)沉香属Aquilari植物有15种以上,大多数分布在印度、马来西亚、越南等地[1]。我国沉香属植物只有一种,即白木香Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg,是我国特有的珍稀濒危药用植物[2],主要分布于热带、亚热带地区,其树脂习惯上称为国产沉香、土沉香或莞香。沉香用途广泛,药用价值高,具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘之功效,主治气逆喘息、呕吐、呃逆、心腹疼痛、大肠虚闭、腰膝虚冷等症。目前,对白木香的利用主要集中在以其茎、干生产沉香,但由于结香周期过长,且采香后对树木的损伤大,以致对白木香资源的利用率很低。因此,研究白木香其他组织的用途是提高该植物资源利用率和经济效益的有效途径。本研究对白木香果皮提取物进行抗菌活性研究,为综合开发利用白木香资源奠定基础。
    1材料
    白木香果实采自广东省恩平市良西镇林场,经作者鉴定为正品,室内阴干,去除种子后,粉碎。
    PYX-DHS电热恒温培养箱(湖北省黄石医疗器械厂);YXQ.WY21-600电热高压蒸气灭菌锅(广州市华南医疗器械有限公司);超净工作台(上海恒益科技有限公司);RE-2000型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。三氯甲烷(分析纯,广州化学试剂厂);硫酸卡那霉素(MBCHEM公司);制霉菌素(MBCHEM公司)。
    金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosa、大肠埃希菌Escherichia coli、绿色木霉Trichoderma roseum、黑曲霉Aspergillus niger、黄曲霉Aspergillus flavus,均保存于广东省微生物研究所。
    金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌采用LB培养基;绿色木霉、黑曲霉、黄曲霉采用PDA培养基。
    2方法
    2.1白木香果皮提取液的制备称取已粉碎白木香果皮3 g,用三氯甲烷冷浸24 h,过滤,滤液于旋转蒸发仪浓缩至干,称重,得提取物的质量为83.0 mg,得率为27.3 mg·g-1。将提取物用二甲基亚砜(DMSO)溶解配50 g·L-1的浓度,并用无菌水稀释成25,10,5,0.5,0.25 g·L-1质量浓度,备用。
    2.2菌种活化及菌悬液制备细菌活化及菌悬液制备:将细菌接种于LB液体培养基中,37℃培养24h,用无菌生理盐水稀释,配制成1×106~1×107CFU·mL-1密度的菌液。
    真菌活化:挑取真菌斜面菌种一小块接种于PDA平板中央,28℃恒温箱培养72 h。
    2.3抗细菌活性的测定抗细菌活性的测定采用滤纸片法[3-4]。取制备好的细菌悬液0.2 mL,加入已倒有LB固体培养基的平皿表面,用涂布棒均匀涂布。用无菌镊子夹取厚度为1.5 mm、直径6 mm的滤纸片呈三角形置于含菌平板上,每个菌种设3皿重复,同时在滤纸上滴不同浓度的提取液10μL,以DMSO代替样品作空白对照,以20 mg·L-1的硫酸卡那霉素作阳性对照,将平板置于37℃恒温箱培养24h,测量抑菌圈直径的大小。
    2.4抗真菌活性的测定抗真菌活性的测定采用生长速率法[5]:分别取不同浓度提取液0.1 mL均匀涂布到含PDA固体培养基的培养皿中,在平皿中央分别接入直径为4 mm的绿色木霉、黑曲霉、黄曲霉的菌饼,每处理重复3皿,以DMSO代替提取液作空白对照,以20 mg·L-1的制霉菌素作阳性对照。置于28℃恒温培养箱培养48 h,记录菌饼生长直径,计算抑制率。
    抑制率=(空白对照平均纯生长量-处理平均纯生长量)/空白对照平均纯生长量×100%,其中纯生长量(mm)=菌饼生长直径-4。
    2.5最低抑菌浓度的测定采用连续稀释法[6]:取白木香果皮提取液按试管二倍稀释法,将细菌和真菌分别用LB液体培养基和PDA液体培养基按1∶2,1∶4,1∶8,1∶16,1∶32,1∶64比例稀释,提取物质量浓度分别为25,12.5,6.25,3

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