中药方剂鸡鸣散的时问药理学实验研究
韩军，宋建国
摘要 目的：研究鸡呜散(Ji-Min异．San，JMS)对动物模型的镇静、刹尿、抗凝作用；探讨鸡呜散药理作用的昼夜节律性差异，验证前人关于鸡呜散择时用药的科学性。方法：以小鼠走动时间、前肢上举次数和自主活动为指标观察鸡呜散镇静作用及其昼夜差异；用代谢笼法观察鸡呜散利尿作用及其昼夜差异；用玻片法观察鸡呜散抗凝作用及其昼夜差异。结果：鸡呜散对小鼠有明显的镇静作用，使小鼠走动时间、举上肢次数及活动次数均明显减少，用药后小鼠原有活动昼夜节律消失；鸡呜散有良好的利尿作用，用药后明显增加排尿量，且作用呈昼夜差异，夜问用药效果明显优于白昼；鸡呜散有明显的抗凝作用，用药后明显延长小鼠凝血时间(CT)，且作用呈昼夜差异，白昼用药CI．延长显著长于夜间。结论：鸡呜散具有良好的镇静、利尿及抗凝作用，且利尿、抗凝作用呈昼夜节律性差异，在动物休息期末、活动期初用药疗效较好。论文发表www.lwkoo.cn毕业论文
关键词 鸡呜散；昼夜节律；镇静；利尿；抗凝
中药方剂鸡鸣散出自《证治准绳》，具有祛湿化浊、行气鳃郁、通络除滞之功效。临床实践证实，鸡鸣散对骨伤科及软组织损伤有较好疗效⋯，对肿痛等症状疗效明显且对痛风、滑囊炎等也有较好疗效㈨。文献记载，本方在“平旦鸡呜时”服动用可得最佳疗效，故名鸡鸣散。但迄今尚未见对鸡鸣散的药理学作用及其昼夜差异的系统研究报告。
本研究根据鸡鸣散的功效、临床应用及组成药物的已知药理作用，在前期研究鸡呜散镇痛抗
炎作用的基础上[3】，设计了方剂对动物模型的镇静、利尿、抗凝作用等药理实验，旨在全面初步探讨鸡鸣散的药理作用及其昼夜差异，为前人关于鸡鸣散清晨用药经验的合理性、科学性提供时间生物学及时间药理学实验依据。
好。
l材料与方法
1．1药物鸡鸣散原方原量，饮片由皖南医学院弋矶山医院药剂科购得，并经鉴定无误。药材饮片常规水煎，浓缩、回收至含4．8 g生药／mL溶液备用。
1．2实验动物 昆明种小鼠，舍旱各半，6周龄，体重(20±2)g，每lo只1笼饲养；sD大鼠，8周龄，套竿各半，体重150～200 g，每6只1笼饲养。动物由南京青龙山动物饲养中心提供，质量合格证号：渊(苏)2002—0018。 1．3实验条件自实验前2周，动物置于人工调控明暗(明期06：00—18：00，LD 12：12 h)，室温(22±1)℃，相对湿度为(60±10)％条件下同步饲养。实验过程中维持相同条件，动物可自由进水、进食。
1．4主要仪器Y1SlA多功能小鼠自主活动记录仪：山东省医学科学院设备处；大鼠代谢笼：南京药物研究所。
1．5镇静作用及其时辰差异实验【．】
1．5。l走动时间和拳双前肢法小鼠40只，随机分为4组，即06：00、12：00、18：00及24：00组。给药前分别于相应时间将小鼠置动物活动箱中适应5 rnin，记录2 IIlin动物走动时间及双前肢向上抬举次数，作为正常值。次日，分别于相应时间i，g．给予Ns及鸡呜散7．5 mukg，二次用药时间间隔72 h。用药后l h，按同法测定小鼠走动时间和双前肢向上抬举次数。
1．5．2活动计算法小鼠40只，随机分4组，分组方法同上法。给药前分别于相应时间将小鼠置自主活动记录仪中适应3 TIlin，记录2HliII动物的活动次数，作为正常值。次日，分别于相应时间i．g．给予NS及鸡鸣散7．5 mUkg，二次用药时间间隔72 h。用药后l h，按同法测定小鼠活动次数。
1．6利尿作用及其时辰差异实验H1 雄性大鼠，按文献方法筛选合格受试动物。取合格大鼠40只，随机分4组，分组方法同1．5．1。给药前轻压下腹部尽量使膀胱排空，水负荷30ⅡliTI后，动物分别于相应时间i．g．给予Ns及鸡鸣散5．8Ⅱ“kg，二次用药时间问隔72h。给药后将动物置于代谢笼内，收集6 h尿量。
1．7抗凝作用及其时辰差异实验H1 小鼠踟只，随机分8组，鸡呜散及Ns各4组，即06：00、12：00、18：00及24：00组。各组动物于相应时间i．g．给予鸡鸣散及NS 7．5 mUl(g，每天1次，连续用药7 d，末次用药后l h眼球采血，用玻片法测凝血时间(CI')。
1．8统计学处理数据以均数±标准差(i±s)表示。生物时间序列资料的昼夜节律以余弦法
(siI硝ec嘴ir研rnethod)分析并求算参数。组问数据的统计学差异用￡检验分析，P<0．05表示差异有统计学意义。
2结果
2．1镇静作用及其时辰差异实验
2．1．1走动时间和举双前肢法正常小鼠行走时间及举上肢次数均呈昼夜差异(P<0．01)，白
昼明显少于夜间。最佳拟合余弦曲线分别为：K=100．28+15．52C0s(O．26f+O．50)；yi=24．92+
8．62cos(0．26￡+0．59)。NS组动物活动规律无明显改变，保留了昼夜节律性(P<0．01)，最佳拟合余弦曲线分别为：y．=9r7．10+16．40c惦(o．26f+O．45)；K=23．20+7．19C惦(O．26f+O．39)。鸡呜散对小鼠有明显的镇静作用，与Ns组比较，明显缩短动物走动时间，减少举上肢次数(P<O．0l，图1、2)，但动物原有的昼夜活动节律性差异消失(P>0．05)。
2．1．2 活动计算法 正常小鼠和Ns组小鼠2 nlin内活动次数均呈昼夜差异(P<0．01)，最佳拟合余弦曲线分别为：y；=61．02+14．33c璐(0．26l+O．89)；K=60．73+14。65C∞(0．26￡+0。94)。与NS组比较，鸡呜散用药明显减少小鼠的活动次数(P<0．05或P<0．0l，图3)，但动物原有昼夜活动节律消失(P>O．05)。
2．2利尿作用及其时辰差异实验NS组大鼠排尿量有明显昼夜差异，24：00尿量多于06：00(P<0．01)，但昼夜节律性不显著。鸡呜散有明显的利尿作用，用药组大鼠排尿量较NS组显著增多(P<0．0l，图4)，18：00及24：00用药效果明显优于06：00(尸<0．01)，具有明显的昼夜节律(P<0．05)。最佳拟合余弦曲线为：F=2．58+0．48C0s(0．26f+1．05)。
2．3抗凝作用及其时辰差异实验 NS组小鼠CT呈昼夜差异(P<0．01)，夜间CT明显短于白昼。最佳拟合余弦曲线为：K=63．35+22．58cos(0．26￡+0．73)。鸡呜散具有明显的抗凝作用，12：00、18：00、24：00用药较NS组相应时间CT明显延长(尸<0．01，图5)，且其抗凝作用也呈昼夜差异(尸<0。01)。最佳拟合余弦曲线为：y；=84．27+19．90C0s(0．26￡+0．22)。实验结果尚表明，鸡呜散对小鼠Crr的影响并不改变动物原有的昼夜节律模式，只是在用药前基础上平行增高。

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