摘 要：茶条槭悬浮培养细胞经过10%浓硫酸-甲醇提取后，用HPLC 法测定其没食子酸含
量。色谱条件为：流动相为甲醇/水（4/6），流速0.5ml/min，Waters C18 MS 柱，检测波长为
270nm。实验测得的线性范围为 20.0-100μg·mL-1（R=0.9996, n=5）。平均加样回收率为
99.86%，RSD 为0.09%。样品稳定性、实验的精密度及重复性3者的RSD 均小于1.5%。表
明本法是1种测定茶条槭悬浮细胞中没食子酸含量的好方法。
关键词：茶条槭；悬浮细胞；液相色谱；没食子酸
1．引言
没食子酸(Gallic Acid, GA)，又称倍酸，5倍子酸，应用范围很广，主要用于药物、染
料、墨水制造，也用做食品抗氧剂、防腐剂、金属提取剂、紫外线吸收剂、消毒剂、止血收
敛剂、显影剂、化学试剂、泥浆流化剂和葡萄生长剂等。研究表明，以没食子酸为原料制成
的药物可使肿瘤细胞的生长抑制或凋亡[1]，还可作为抗氧剂，具有较强的抗氧化作用[2]，在
国际医学上，以没食子酸为原料现已合成抗感染药品如4氧普林(TXP)、溴莫普林(BOP)和
美替普林(MTP)；脑复清( Exifone),用于治疗老年意识障碍；联苯双脂，用于治疗慢性肝炎；
克冠卓、忧心平、心痛平，用于心绞痛、心衰、心肌梗塞恢复期等；通牌酯,用于治疗脑血
栓；Troxipide ,用于治疗胃溃疡；克冠酸,用于治疗心肌梗塞；没食子酸锑钠,用于治疗血吸虫；
鞣花酸，用于防癌和抗癌[3]。目前，没食子酸产品供不应求，销售价格在20～30万元/ｔ。
茶条槭（Acer ginnala Maxim ）为槭树科槭树属的落叶灌木或小乔木，树叶中含有没食
子酸，本文前期工作已获得大量茶条槭悬浮细胞，并确定其中含有没食子酸，我们用高效液
相色谱法测定了茶条槭悬浮细胞中没食子酸含量，实验方法如下。
2. 材料与方法
2.1 材料
茶条槭悬浮培养细胞
2.2 仪器
德国Waters液相色谱系统（包括600泵、717自动进样器、2487检测器、2996检测器、柱温
箱等），Milli-Q Gradient超纯水系统。
2.3 药品与试剂
没食子酸对照品购自中国药品生物制品检定所，甲醇（色谱纯），浓硫酸。
2.4 色谱条件
1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金(20060225010)和东北林业大学青年科研基金(07045)的资助。

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色谱柱为德国Waters C18 4.6 mm ×250 mm，5μm； 流动相为 甲醇：水（4：6）流速:0.5
ml·min-1；检测波长: 270 nm；进样量为10μl；柱温为25 ℃。
2.5 标准品配置
精确称取没食子酸标准品0.0050g，置于50ml 容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。
配制成0.1 mg·mL-1的标准液。
2.6 样品处理
精密称定经100目细胞筛筛过的茶条槭悬浮培养细胞干粉末0.1 g，精密加入2 mL10%浓硫
酸，2 mL甲醇，超声2min，加入甲醇定溶至5mL，60℃水浴1h，0.45μm滤膜过滤，超声10s，
进样。
3. 结果
3.1 线性关系考察
本文在优化色谱条件时，使用C18色谱柱，对流动相甲醇和水的比例以及流速进行了试
验，分别采用1：9、3：7、4：63个比例，采用1ml/min、0.8ml/min、0.6ml/min、0.5ml/min
流速对没食子酸标样进行处理，结果表明甲醇：水=4：6，流速为0.5ml/min时，色谱保留时
间和分离度都比较好。
分别取没食子酸对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，以甲醇定容至5ml容量瓶中，制
得不同浓度的溶液(0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg·mL-1)。每次进样10μl，按上述色谱条件
进行测定对照品峰面积。将上述对照品浓度与相应峰面积进行回归处理，回归方程
为:Y=3.37·107X + 1.45·104，R=0.9996，没食子酸进量在20～100μg·mL-1 范围内样品浓度与
峰面积呈良好的线性关系。
3.2 精密度试验
吸取同1对照品10μL，连续进样5次，测得没食子酸峰面积值，结果RSD =1.02%，表明
精密度良好。
3.3 稳定性试验
吸取供试品溶液10μL，照上述色谱条件，分别在室温放置0、2、4、8、12、16h后进样，
测定供试品溶液中没食子酸峰面积值，结果RSD为1.2%，表明没食子酸峰面积在16小时内稳
定。
3.4 重复性试验
取同1样品，共5份，分别按样品制备方法制备，照上述色谱条件测定没食子酸峰面积，
结果样品中没食子酸平均含量为18.79mg·g-1，RSD=0.18%。表明该法的重复性良好。
3.5 加样回收率试验
取已知没食子酸含量为13.52 mg·g-1的样品，共4份，每份精密称取0.1000g，分别精密加
入没食子酸对照品，按照供试品溶液制备成上样溶液。按上述色谱条件测定没食子酸峰面积，
计算回收率，结果见表1。由表1可知加样平均回收率为99.86%，RSD=0.09%，说明该法加

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样回收率良好。
Tab1 The recovery of gallic acid ( n = 4)
sample/mg control/mg content/mg·g-1 recovery/% mean/% RSD/%
100 0.0501 16.01501 99.81
100 0.1002 18.51288 99.86
100 0.1501 21.01804 99.98
100 0.2003 23.49701 99.77
99.86
0.09
3.6 样品测定结果
分别称取对照品和供试样品，分别制备成上样溶液，精密吸取上述对照品溶液与供试品
溶液10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定,以外标法计算样品中没食子酸含量，测
得的没食子酸含量为14.02mg·g-1，色谱峰如图1、2。
Figure 1 spectrum of control
Figure 2 spectrum of sample
4. 讨 论
没食子酸的测定方法很多，主要有水解法、紫外分光光度法、TLC法和HPLC法。目前
已在地稔[4]、翻白草[5]、石榴皮[6]等植物中利用HPLC法测得没食子酸含量，本文建立了用
HPLC测定茶条槭悬浮细胞中没食子酸含量的方法，有效的将其与茶条槭悬浮细胞中其它干
扰性的成分进行分离，精密度高，准确度高，操作简便、快速，方法实用可靠。能作为诱导
茶条槭悬浮细胞高产没食子酸分析的1种有效手段。

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参考文献
[1] Yoshioka K, Kataoka T. Hayashi T, et al. Induction of apop tosis by gallic acid in human stomach cancer
KATO III and colon adenocarcinoma COLO 205 cell lines . Oncol Rep, 2000, 7 (6) : 1221-1223.
[2] Sakagami H, Satoh K. Prooxidant action of two antioxidant: ascorbic acid and gallic acid J. Anticancer Res,
1997, 17 (1A): 221-224
[3] Pan xia, Utilization and advance of Acer ginnala, Protection Forest Science and Technology J (防护林科技),
2005,67(4):68-72
[4] Li Cai-tang,Song You-xin,Li Jing,et al., Determination of gallic acid in Melastoma dodecandrum Lour1. by
HPLC,Journal of jiangxi chinese medicine college J(江西中医学院学报),2005,17(4):37
[5] Zang Ying,Zang Li-mu,Gao Yun-sheng,et al., Determination of gallic acid in Potentilla discolor Bunge by
HPLC, Chin Hosp Pharm J(中国医院药学杂志),2006,26(3):255-256
[6] ZHou Ben-hong, Liu Chun, Wu Zheng-hua,et al,Determination of gallic acid in Punica granatum L.
extraction by HPLC,Chin Hosp Pharm J（中国医院药学杂志）2005, 25(12):1148-1150
Content Determination of Gallic Acid in suspension cells of
Acer ginnala by HPLC
Qi Fenghui, Zhan Yaguang, Dong Jie
School of life science, Northeast Forestry University, Harbin (150040)
Abstract
A HPLC procedure was established to determin the content of gallic acid in suspension cells of Acer
ginnala. The separation was performed on Waters - C18 column with a mobile phase of methanol/water
(4/6) and detected at wavelength of 270 nm. The results showed that the linearity range was
20.0-1000μg·mL-1 (R=0.9996, n =5) and the average recovery of gallic acid was 99.86% , RSD was
0.09%. RSD values of sample stablity, precision and repetition were below 1.5%. All these results
indicated that this preocedure works well.
Keywords: Acer ginnala; suspension cell; HPLC; Gallic Acid